USA    |    Global :  English    简中    繁中    |    地圖
  Login    |      購物車
 
技術平台
  FISH
  CISH/SISH
  CGH
  SKY
  相關連結
 
  FISH

螢光原位雜合(Fluorescence in situ Hybridization)

原位雜交(ISH)是一種功能強大的技術,可用於檢測組織或細胞中染色體上的DNA或RAN序列的存在、缺失、定位、完整性和數量。 ISH基於互補核酸單鏈的鹼基配對(雜交)檢測特異序列。在這種技術中,一條鍊是標記的序列片段(探針),僅與基因組中與之高度或者完全互補的序列結合,另一條鏈存在於待分析的樣本材料中。因此,原位雜交始於製備分析用的樣本和探針。將樣本中的典型雙鏈DNA變性成單鏈,並需要對探針進行標記以便於檢測。

19世紀60年代開發了ISH的基本步驟,採用放射性同位素進行探針檢測。 19世紀80年代初,開發了採用熒光染料進行探針可視化的方法。因為這些標記更安全、更穩定、更易於處理,今天,大多數的原位雜交採用FISH方法。 FISH的另一個重要優點是:通過採用幾種不同的熒光染料,可同時檢測單個樣本中的不同靶結構。

FISH已成為細胞遺傳學的一種重要技術。探針片段有多種來源:通過重組方法,或者通過PCR。今天,最常用的探針類型是經準確構建的細菌人工染色體(BAC)。設計或選擇合適的FISH探針往往需要在靈敏度和特異性之間取得平衡,即,一個探針必須足夠大,以確保特異性結合,以及攜帶足夠數量的標記進行檢測。另一方面,隨著探針長度的增加,探針與其他靶序列雜交的可能性也增加。此外,探針如果太長,可能產生較大的信號或彌散性信號。

可直接將熒光分子與探針連接,或者用抗原或化學基團標記探針,抗原或化學基團隨後與熒光基團結合,完成探針標記。根據使用的方法,標記過程可能從幾個小時到幾天不等。稱為“原位”是為了強調如下事實:不是檢測試管中分離的靶核酸分子,而且可直接檢測新鮮或固定細胞或組織中的靶核酸分子。

採用FISH技術,可直觀地觀察中期(凝集)染色體上的染色體重排或小到幾兆鹼基對(百萬個鹼基對)的畸變。對於間期(伸展)染色體而言,分辨率可達到約1Mb。最近開發的幾種方法,涉及染色質絲的人工伸展,甚至能達到更高的分辨率。

FISH方法無法檢測鹼基水平的突變,例如,一些遺傳性疾病潛在的點突變。然而,FISH技術具有里程碑式的貢獻:它使基因和人體基因組的物理圖譜緊密聯繫起來。

在研究領域,FISH可用於鑑定基因的位置、確定人體染色體的數目和完整性,以進行人體染色體核型分析和染色體塗染。在臨床實驗室,FISH已成為檢測染色體畸變的一種標準工具,特別在產前和癌症診斷方面。目前許多基因的FISH探針以及操作已獲得了分析和臨床驗證,更多的正在開發和檢測中。

CytoTest Inc.  |  9430 Key West Avenue, Suite 210, Rockville, MD 20850, USA
電話:+1-202-505-0204  |  +1-202-617-0180  |  傳真:  +1-240-238-6615  電子郵件: sales@cytotest.com

© 2013-2021 CytoTest Inc. 版權所有
Website Design | Youhome