Se recomiendan 10 μl de sonda para una reacción en un área de hibridación de 22 x 22 mm; Se recomiendan 8 μl de sondas para una reacción en un área de reacción de 18 x 18 mm; Se recomiendan 5 μl de sondas para una reacción en un área de reacción circular de 12 mm de diámetro. Una cantidad insuficiente de sonda puede provocar señales desiguales o débiles.

El rango de tamaño de la sonda FISH de CytoTest es típicamente entre 50 ~ 400 kbp, que es lo suficientemente corto como para ingresar fácilmente a las células y lo suficientemente largo para ser específico y exhibir una señal fuerte.

Las extensiones de metafase recién preparadas, la muestra de citología, las líneas celulares, las secciones congeladas y los portaobjetos archivados con parafina se pueden usar con la sonda FISH de CytoTest.

Se recomienda observar de antemano la curva de crecimiento celular y agregar el (los) medicamento (s) que detienen de manera óptima las células en la metafase del ciclo celular en el momento apropiado.

Los cromosomas que aparecen enredados se producen como resultado de una dispersión insuficiente; Puede deberse a la adición de una solución de fijación demasiado rápido, a que las células no se dispersan adecuadamente o al corto tiempo de reacción del buffer hipotónico. Se recomienda ajustar la temperatura y la humedad del ambiente al preparar el portaobjetos; Además, antes de colocar las células en el portaobjetos, coloque una gota de solución de fijación nueva inmediatamente antes de colocar la suspensión celular fija. También puede girar suavemente el portaobjetos para ayudar a la propagación de las células y desenredar los cromosomas. 

Esto podría ser causado por una temperatura de desnaturalización elevada y un tiempo de desnaturalización prolongado.

La concentración insuficiente del fármaco o el tiempo de reacción al detener las células en metafase dará como resultado una morfología cromosómica alargada; por el contrario, una concentración excesiva o un tiempo de reacción prolongado dará como resultado una morfología cromosómica acortada que puede dificultar la identificación de los cromosomas.

La alta velocidad centrífuga, la temperatura elevada cuando se usa tampón hipotónico y el tiempo de reacción prolongado son todas las causas posibles de este fenómeno. Modifique sus condiciones experimentales en consecuencia.

Para resolver el problema del exceso de restos celulares, recomendamos que lave las células con una solución de fijación varias veces para obtener una suspensión celular limpia antes de preparar los portaobjetos, especialmente para los linfocitos cultivados a partir de sangre total. A pesar de alguna pérdida celular inevitable debido al proceso de lavado, los restos celulares también serán eliminados. En principio, el tratamiento de digestión enzimática puede omitirse cuando se usan portaobjetos de cromosomas o portaobjetos de células para el experimento FISH; sin embargo, si hay un exceso de citoplasma residual en el fondo, puede eliminarlo con un tratamiento de digestión enzimática.

No recomendamos que utilice sondas diferentes en la misma diapositiva de muestra. Aunque la mayoría de las sondas pueden eliminarse desnaturalizando la solución a alta temperatura, todavía puede quedar una pequeña cantidad de sondas en el portaobjetos y provocar interferencias de fondo. Sin embargo, el mismo kit de sonda se puede usar repetidamente en el mismo lugar para el experimento FISH.