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Hibridación in Situ Cromogénica (CISH) y Hibridacioón Situ Mejorada con Plata (SISH)

Una alternativa simple y práctica a FISH que no depende de la costosa instrumentación y experiencia en microscopía de fluorescencia se ha desarrollado y refinado desde 2000 y se llama Hibridación cromogénica in situ (CISH).  

En CISH, las sondas se marcan con un resto antigénico y se detectan mediante anticuerpos conjugados con una enzima, típicamente peroxidasa de rábano picante (HRP) o fosfatasa alcalina (AP), que cataliza reacciones de sustratos cromogénicos. Los cromógenos resultantes precipitan en el sitio objetivo de la sonda y se pueden detectar con un microscopio de campo brillante estándar. 

Además de proporcionar una alternativa económica fácil de usar para FISH, los métodos de hibridación cromogénica tienen la clara ventaja de permitir la visualización del contexto del tejido, incluido el núcleo y la forma celular, junto con la señal de la sonda en la misma imagen. A diferencia de la mayoría de los reactivos de detección fluorescentes, los agentes cromogénicos utilizados en la mayoría de los métodos CISH son químicamente estables y no se desvanecen con el tiempo, lo que permite un fácil almacenamiento y un examen repetido de las muestras. 

 SISH CISH

Una variación cada vez más popular de las técnicas de hibridación in situ emplea la detección metalográfica. Aquí, la sonda de hibridación está vinculada a una enzima que provoca la neutralización y el depósito de metal, más comúnmente plata, fuera de la solución y en el sitio objetivo de la sonda (Hibridación in situ mejorada con plata, SISH). Si bien la mancha resultante tiene un solo color, negro, generalmente es densa, de grano fino y absolutamente estable. 

Una de las otras ventajas de las pruebas SISH es que requiere menos tiempo que los métodos fluorescentes establecidos. Además, como con otros protocolos CISH, los resultados y el contexto morfológico de células o tejidos se pueden analizar fácilmente bajo un microscopio convencional de campo brillante. Además, la mayoría de los protocolos SISH son adecuados para adaptarse para ejecutarse de manera totalmente automatizada. Aunque FISH sigue siendo el estándar de oro aceptado para la detección de muchas anomalías cromosómicas específicas, se está desarrollando y validando un número creciente de alternativas de sonda y método de SISH, especialmente en las pruebas de genes de cáncer amplificado.
 

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