Categories |
|
 请问预先处理石蜡包埋组织切片的步骤中,何者最为重要 ?
脱蜡以及酶消化结缔组织,帮助细胞暴露在表面最为重要,详细步骤请参考本公司产品说明手册。
|
 请问如果封片胶没有完全覆盖盖玻片与载玻片接缝处,会影响FISH实验结果吗?
避免杂合的过程中探针蒸发过多,而影响结果甚至是造成背景肮脏,请务必在盖玻片与载玻片接缝处,确实用封片胶覆盖。
|
 将荧光探针滴在玻片样本上,之后我要如何盖上盖玻片才不会产生气泡?
建议盖玻片覆盖时,以45度角小面积开始缓慢而轻轻覆盖。
|
 请问FISH杂合(hybridization) 时,实验中的玻片要如何放置在37°烘箱(oven)或培养箱(incubator)?
建议放置保鲜盒中,并且在底部铺满溼润的纸巾来保持一定的湿度,之后就将玻片放在保鲜盒中置于37°培养箱。
|
 请问FISH杂合(hybridization) 的温度以及作用的时间?
建议37°C 温度下,最佳作用时间12~16小时之间,太短的作用时间会降低信号表现,时间过长会产生大量背景。
|
 请问变性溶液(denature solution)如何保存?
|
 请问不足或是过度加热变性(denature)玻片样本会影响FISH实验结果吗?
在玻片样本加热变性的步骤当中,过高的温度以及过久的时间都会导致细胞染色体结构上伤害 ,严重者不仅不能清楚辨认出染色体正确编号,甚至与荧光探针结合度下降 ; 相对地如果温度与作用时间不足,也是会使得FISH实验结果不如预期。
|
 请问进行FISH实验前,玻片样本加热变性的步骤需要特别留意什么?
如果是进行玻片与探针分别加热变形,请先将变性溶液(denature solution)要置于水域槽75°C (请依照各实验室标准步骤)预热30分钟以上 ,才能开始进行实验 ; 如果是选择玻片与探针共同加热变性法 (co-denature) ,请先将加热金属板75°C 预热30分钟以上, 注意盖玻片与载玻片之间的封片胶是否确实完整覆盖到,之后75°C加热2分钟。
|
 请问FISH结果出来,背景太脏的情况下,我可以进行2次清洗吗?
可以, 但是会有少许荧光探针脱落的可能性, 请参考本公司网站上清洗玻片步骤,清洗步骤结束后,仍然需要重新滴上DAPI方能在显微镜下观察。
|
 请问清洗液加热之后变成白色混浊状,请问这是正常现象吗?
|